Caracterización funcional e inmunológica de una fosfolipasa A2 básica miotóxica del veneno de la serpiente peruana Bothrops atrox

Abstract

La serpiente Bothrops atrox, la mayor responsable de los accidentes ofídicos en el Perú, desencadena una fisiopatología por envenenamiento que se ve caracterizada en gran parte por la miotoxicidad. Por ello, en la presente tesis se ha aislado al componente responsable de la miotoxicidad del veneno de B. atrox para estudiar sus principales características biológicas e inmunológicas. La proteína fue purificada en un paso cromatográfico, empleando una resina CM-Sephadex C-25, mediante una gradiente de NaCl 0.6 M. El análisis por SDS-PAGE, mostró una sola banda de aproximadamente 13 kDa bajo condiciones reductoras, mientras que una banda ancha de 24 kDa fue observada bajo condiciones no reductoras. La proteína aislada mostró actividad enzimática de fosfolipasa A2, tanto para retardo de coagulación de yema de huevo como para el ensayo espectrofotométrico de fosfatidilcolina. En cuanto a su dosis miotóxica mínima, esta fue 12.30±0.95 µg, mientras que para el veneno total, el valor fue 23.50±1.09 µg. La dosis edemática mínima fue de 26.00±1.15 µg. Además, la enzima presento actividad anticoagulante. Por otro lado, se logró obtener un suero anti-miotoxina de B. atrox, producido en conejos, con un título de 16 000. Al realizar los ensayos de neutralización del suero anti-miotoxina, un suero anti-B.atrox y el suero antibotrópico del INS, se obtuvieron como dosis efectiva media 0.34 mL de suero/mg de miotoxina, 0.93 mL de suero/mg de miotoxina y 0.1 mL de suero/mg de miotoxina, respectivamente. Finalmente, los anticuerpos anti-miotoxina reaccionaron de forma cruzada con los venenos de B. atrox (1:8000), Bothrops brazili (1:10 000), Bothrops pictus (1:4000) Lachesis muta (1:2000) y Crotalus durissus (1:1000). De esta forma, se logró purificar y caracterizar funcionalmente una fosfolipasa miotóxica del veneno de B. atrox, así como obtener anticuerpos a partir de esta para obtener más información acerca de su inmunogenicidad.