Evaluación de la integridad acrosomal de espermatozoides de alpaca en muestras frescas sin fijar (0 horas) y muestras fijadas en formaldehído (24 horas y 1 semana) mediante citometría de flujo

Abstract

Evalúa la integridad acrosomal de espermatozoides de alpaca en muestras frescas sin fijar (0 horas) y muestras fijadas en formaldehido (24 horas y 1 semana) mediante citometría de flujo utilizando el fluorocromo FITC-PSA. Se procesaron 26 testículos de alpaca procedentes del Camal Municipal de Ninacaca – Pasco, de los cuales se recuperaron espermatozoides epididimarios y se formaron 3 grupos (0 horas, 24 horas y 1 semana). Las alícuotas fueron incubadas por 10 minutos a 38°C en oscuridad con 2.5 μl de FITC-PSA (Stock 100 μg/ml) para obtener una concentración final de 2.5 μg/ml. Las muestras de 24 horas y 1 semana fueron fijadas con 100 μl formaldehído al 4% por 30 minutos y luego almacenadas a 4 °C en oscuridad para posteriormente realizar lavados con PBS por centrifugación a 600 g durante 8 minutos para retirar el formaldehído, luego se eliminó el sobrenadante y se agregó 100 µl de PBS a 37 °C para su lectura por el citómetro de flujo. Se consideraron espermatozoides con integridad acrosomal aquellos que no presentaron fluorescencia verde (FITC-PSA). Los resultados obtenidos de la integridad acrosomal son a 0 horas (95.89 ± 4.35), 24 horas (97.24 ± 3.36) y 1 semana (97.21 ± 3.49). Los porcentajes de integridad acrosomal a las 0 horas fueron comparados con los de 24 horas y 1 semana utilizando el coeficiente de correlación Pearson, presentándose correlaciones positivas y fuertes (r=0.8589 y r=0.8419 respectivamente). También se realizó la gráfica de Bland y Altman, en las cuales la mayoría de los puntos cayeron dentro de los límites de concordancia del promedio de las diferencias. Por lo tanto, se concluye que los porcentajes de integridad acrosomal de espermatozoides de alpaca en muestras frescas sin fijar (0 horas) es similar al obtenido en muestras fijadas en formaldehído (24 horas y 1 semana) determinada mediante citometría de flujo.