Detección de genes Gyr(A) y Erm(B) de resistencia antimicrobiana en cepas patógenas de Campylobacter spp. aisladas de canales de pollos comercializados en Lima Metropolitana

Abstract

El presente estudio tiene como objetivo la detección de genes de resistencia a antibióticos gyrA y ermB en cepas de Campylobacter spp. aisladas de piel de pollo comercializadas en los Mercado Metropolitano de Lima. Para proceder se tomaron muestras de 120 pieles de pollo de los mercados municipales de Lima Metropolitana (Santa Anita (20), San Martín de Porres (30) e Independencia (70)). Las muestras se sometieron a un proceso de enriquecimiento previo de 24 horas en caldo Preston a 42 ° C en un ambiente microaerófilo. Una submuestra de 100 µl se incubó en agar mCCDA durante 48 h en las mismas condiciones, una vez que se confirmó el crecimiento, las colonias se evaluaron para determinar la forma de las colonias y la forma celular y su motilidad. Como control positivo se utilizaron Campylobacter coli ATCC 33559 y Campylobacter jejuni ATCC 33560. Después de que se confirmó el crecimiento en agar mCCDA, las muestras se incubaron en agar sangre (5%) en condiciones normales durante 24 h-48 h a 42 ° C, una vez que se confirmó el crecimiento en estas condiciones, las muestras se analizaron para la hidrólisis de oxidasa, catalasa e hipurato, esta última diferencia a Campylobacter jejuni de otras especies de Campylobacter. Para evaluar la sensibilidad a los antibióticos, se preparó una dilución McFarland 0.5 y se inoculó en agar Müller Hinton Sangre (5%) con 3 antibióticos sensibles (Azitromicina (15µ), Eritromicina (15µ) y Ciprofloxacina (5µ)) en condiciones microaerófilos durante 24-48 h. Las muestras se analizaron por PCR utilizando el primer 16S para el género y los primers GlyA y lipO para las especies (Campylobacter coli y Campylobacter jejuni, respectivamente). En las PCR de detección del gen de resistencia se utilizaron los primers ermB y gyrA, en el último caso se usó una enzima de restricción (Rsal) para detectar la mutación puntual Thr86Ile. Los resultados obtenidos muestran una prevalencia del 97,5% (117/120) de Campylobacter spp. en Mercados evaluados (90% San Martín de Porres (27/30), 100% Santa Anita (20/20) y 100% Independencia (70/70)). La prueba bioquímica indicó que ninguna muestra fue positiva para Campylobacter jejuni. Las cepas fueron confirmadas como Campylobacter coli mediante el PCR por especie. Todas las cepas fueron resistentes a los antibióticos utilizados en la prueba de sensibilidad. La PCR para detección del gen ermB indico un 53% de muestras positivas como portadoras de este gen. Mientras la PCR para detectar la mutación en el gen gyrA indicó que 12 de 30 muestras tenían mutación puntual Thr86Ile en su gen gyrA.